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脫細胞纖維環(huán)基質(zhì)作為組織工程纖維環(huán)支架的可行性研究

發(fā)布日期:2014/6/12 15:22:59 瀏覽次數(shù): 6338次

  目的:對天然纖維環(huán)組織進行脫細胞處理,探討脫細胞纖維環(huán)基質(zhì)作為組織工程纖維環(huán)支架的可行性。

  方法:取新鮮豬尾纖維環(huán)組織,先放入Tris-HCl低滲緩沖液中浸泡48h,再用含3% TritonX-100的Tris緩沖液脫細胞處理72h,接著用含DNase Ⅰ和RNase A的緩沖液處理24h,去離子水沖洗干凈。HE染色觀察脫細胞纖維環(huán)基質(zhì)的細胞去除情況及大體結構;甲苯胺藍染色和番紅O染色觀察細胞外基質(zhì)GAG和膠原的保留情況;Hoechst 33258染色觀察有無細胞及細胞碎屑殘留;羥脯氨酸試劑盒測定膠原含量、DMMB法測定GAG含量,與天然纖維環(huán)進行對比;電鏡觀察脫細胞過程對纖維環(huán)組織的超微結構有無影響;測定脫細胞纖維環(huán)基質(zhì)的拉伸彈性模量,并與天然纖維環(huán)進行對比。

  結果:HE染色可見脫細胞纖維環(huán)基質(zhì)中無細胞殘留,膠原排列整齊;甲苯胺藍染色和番紅O染色呈強陽性,說明GAG和膠原保留良好;Hoechst 33258染色無細胞及細胞碎屑殘留;膠原含量為(150.83±2.43)μg/mg,與天然纖維環(huán)膠原含量(143.99±4.86)μg/mg相比無統(tǒng)計學差異;GAG含量為(41.07±2.54)μg/mg,比天然纖維環(huán)GAG含量(54.01±2.84)μg/mg稍低;電鏡可見脫細胞過程對標本的超微結構無影響;脫細胞纖維環(huán)基質(zhì)的拉伸彈性模量為(29.73±4.17)MPa,天然纖維環(huán)為(30.94±4.28)MPa,兩者相比無統(tǒng)計學差異。

  結論:脫細胞纖維環(huán)基質(zhì)中無細胞及細胞碎屑殘留,細胞外基質(zhì)膠原及GAG保留良好,超微結構無破壞,力學性能保留良好,有望成為一種理想的組織工程纖維環(huán)支架。